医药学论文：中药材 dna 分子标记研究的技术问题 Ⅰ.植物药基因组 dna 的提取[1]

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　本文就近年来有关中药保护心肌细胞的研究情况综述如下。

　　1　对缺糖缺氧损伤的保护作用

　　大量实验研究表明，培养的心肌细胞如缺糖缺氧6小时，则迅速引起细胞内能量耗竭，导致细胞功能受损，LDH等酶溢出，并伴有细胞超微结构损害。研究发现，中药能有效地对上述损害起保护作用。张家新［1］研究发现：在LDH酶水平显著高于正常对照组(P＜0.01)的缺糖缺氧心肌细胞培养液中，加入玫瑰茄提取液后，培养液中的LDH显著低于未加药物的缺糖缺氧组(P＜0.05)，提示该药物能较好的对缺糖缺氧损伤起保护作用。陈兴坚［2］等将中药提取物酸枣仁总皂甙分别用两种浓度(33μg/ml和11μg/ml)加入模型组中，结果发现高浓度组可减轻缺糖缺氧心肌细胞LDH的释放，低浓度组则没有这样的作用，说明该药对心肌细胞的保护作用存有量效关系。值得一提的是：培养的心肌细胞对不同中药的浓度反应也有较大差异，杜锐生［3］研究发现，100μg/ml与250μg/ml的三七总皂甙均能减少缺糖缺氧组心肌细胞的LDH与α-羟丁酸脱氢酶(α-HBD)的释放，但作用以100μg/ml浓度为明显，250μg/ml的浓度反有减弱的趋势，提示中药保护心肌细胞与适宜的浓度相关，过大过小均不能达到最大效应。

　　有关中药保护心肌细胞缺糖缺氧损伤机理的研究，近年来也取得了长足的进展。洪行球［4］采用中药复方何氏心悸方(党参、五味子、麦冬等)观察其对细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响，该酶是三羧酸循环及线粒体氧化磷酸化有关的主要酶。实验发现，缺糖缺氧组细胞内SDH染色示活性明显降低，加入该药抽滤液后可明显提高SDH的活性，且使细胞搏动恢复，说明何氏心悸方是通过改善心肌细胞内代谢起到保护心肌细胞作用。汪长华［5］等采用计算机技术和SDH染色相结合的方法。将该酶活性量化，并检测LDH.心肌细胞内总磷酯和总胆固醇含量以及Ca2+—Mg2+ATP酶活性进行综合分析发现，大豆磷脂脂质体可抑制心肌细胞培养液中LDH的活性和心肌细胞内SDH的反应性增加，减轻心肌细胞Ca2+—Mg2+ATP酶活性的降低，提高心肌细胞总磷脂和总胆固醇的含量，说明大豆磷脂脂质体减轻培养心肌细胞缺糖缺氧性损伤，可能与其作用于细胞膜脂质有关。近年来，有关中心肌细胞保护作用机理研究已达到分子水平。杜锐生［3］用同位素标记法研究发现，三七总皂甙可以减少缺糖缺氧心肌细胞DNA合成的降低。王玮［6～7］用精制血府胶囊(柴胡、赤芍、红花、桃仁等)取药给兔灌胃后，心脏采血，分离含药血清，研究其对缺糖缺氧心肌细胞的保护作用，发现该药可以提高缺糖缺氧心肌细胞的3H—urid(尿嘧啶核苷)及3H—Leu(亮氦酸)的掺入率，提示中药能够减轻缺糖缺氧心肌细胞的DNA、RNA、蛋白质等大分子物质的合成，起到保护心肌细胞的作用。王玮进一步研究显示，该药能够改善心肌细胞-氧化氦合成酶(NOS)基因的表达，可能亦是精制血府胶囊保护心肌细胞的重要机理之一。

　　心肌细胞超微结构的研究，进一步对中药保护心肌细胞提供形态学依据。陈家畅［8—10］发现缺糖缺氧6小时的心肌细胞核畸形，染色体边缘浓缩，线粒体肿胀，嵴消失，甚至出现空泡变性，此外，肌原结构破坏，有些区域偶见Z膜和A带，I带模糊不清或消失。有些肌原纤维有断裂和破碎，分别加用黄芪、当归，当归养血汤等后，大部分细胞核正常、染色质均一，肌原纤维内粗细肌丝排列整齐，Z膜、A带和I带清楚。局部未见肌原纤维断裂破碎，说明上述中药有较好的抗心肌细胞缺糖缺氧损伤作用。金花淑［11］发现，熊胆能够明显恢复缺糖缺氧心肌细胞的核畸形、线粒体及肌浆网肿胀，并与对照组比较，糖元增加，分布均匀。另外，中药对缺氧再给氧对心肌细胞结构性损伤也有很好的保护作用。万华印［12］发现：正常细胞超微结构清晰，缺氧15分钟心肌细胞结构基本正常，仅偶见线粒体嵴变平、消失，而缺氧复氧组心肌线粒体损伤明显，肿胀、嵴溶解消失，并可见致密体，A带和I带消失。加入酸枣仁皂甙组及SOD组细胞超微结构明显改善，仅见部分线粒体肿胀，肌原纤维排列整齐，A带、I带清晰可见。提示：酸枣仁总皂甙有明显的抗缺氧复氧损伤作用。

　　2　对缺氧再给氧损伤的保护作用

　　现代病理生理学研究提示：缺氧再给氧损伤主要表现在自由基损伤及钙超载两 个方面。参照Laurse［13］法建立心肌细胞缺氧再给氧损伤模型。万华印［14］发现：缺氧再给氧时，心肌细胞内超氧化构歧化酶(SOD)活性降低，过氧化产物丙二醛(MDA)升高，细胞膜脂质流动性下降，酸枣仁总皂甙能够剂量依赖地显著降低缺氧再给氧心肌细胞MDA医药学论文