请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/19 23:19:25
![请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.](/uploads/image/z/10258018-34-8.jpg?t=%E8%AF%B7%E9%97%AE%2C%E6%88%91%E7%94%A8OVERLAP+PCR+%E5%90%88%E6%88%90%E4%B8%80%E5%B0%8F%E7%89%87%E6%AE%B5%E6%88%91%E8%A6%81%E7%AA%81%E5%8F%98%E7%9A%8479bp%E7%9A%84%E5%9F%BA%E5%9B%A0%2C%E9%9C%80%E8%A6%81%E9%AB%98%E4%BF%9D%E7%9C%9F%E9%85%B6%E5%90%97%3F%E8%BF%98%E6%9C%89%E5%B0%B1%E6%98%AF%2C%E6%88%91%E4%B8%8D%E6%98%AF%E5%B0%86%E4%B8%A4%E4%B8%AA%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E8%BF%9E%E8%B5%B7%E6%9D%A5%2C%E8%80%8C%E6%98%AF%E5%BC%95%E7%89%A9%E6%9C%AC%E8%BA%AB%E4%B9%9F%E6%98%AF%E6%A8%A1%E6%9D%BF%E5%90%88%E6%88%90%E6%88%91%E7%9A%84%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%89%87%E6%AE%B5.)
请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?
还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
一定要用高保真酶的,有两点原因:第一,就是第一条回答,高保真能够保障基因扩增引起的不必要突变.如果你的扩增片段全长只有79bp那就无所谓了,但要参照第二条);第二,就是高保真酶不会在扩增的末尾(即3‘端)加A,引来后续操作不必要的麻烦.
一定要用高保真酶,只要做突变,目标就是只有设计位点被改变,而其他位点不能有变化。如果不用高保真酶,一旦发生错误掺入,后面的实验结果就没有意义了。而且即使用了高保真酶,扩增完成后,也任然需要克隆,测序后,才能确认片段是否满足要求。...
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一定要用高保真酶,只要做突变,目标就是只有设计位点被改变,而其他位点不能有变化。如果不用高保真酶,一旦发生错误掺入,后面的实验结果就没有意义了。而且即使用了高保真酶,扩增完成后,也任然需要克隆,测序后,才能确认片段是否满足要求。
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呵呵,一定要用高保真酶的,有两点原因:第一,就是第一条回答,高保真能够保障基因扩增引起的不必要突变。(呵呵,如果你的扩增片段全长只有79bp那就无所谓了,但要参照第二条);第二,就是高保真酶不会在扩增的末尾(即3‘端)加A,引来后续操作不必要的麻烦。
~.~嗯嗯,谢谢你的答复,其实我想说,我的全长片段就是79bp(可能上面没有描述清楚).其中我就做了一个单突变。也就是一个氨基酸...
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呵呵,一定要用高保真酶的,有两点原因:第一,就是第一条回答,高保真能够保障基因扩增引起的不必要突变。(呵呵,如果你的扩增片段全长只有79bp那就无所谓了,但要参照第二条);第二,就是高保真酶不会在扩增的末尾(即3‘端)加A,引来后续操作不必要的麻烦。
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