除了考马斯亮蓝外还可以根据蛋白质的哪些化学性质对细胞骨架进行细胞内定性与定位检测
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/25 00:00:25
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鬼笔环肽就可以
中文名称:鬼笔环肽 英文名称:phalloidin 定义:由鬼笔鹅膏真菌(Amanita phalloides)产生的一种环肽.可与F肌动蛋白结合,使F肌动蛋白保持稳定.其荧光标记物是鉴定F肌动蛋白的重要试剂.
染色程序
:生理盐水PBS清洗细胞2次,每次10分钟; 3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次; 加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟,夏季时间可以短一些,生理盐水PBS清洗细胞2次; DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次; 吸去多余水分,加荧光封片液(中性或偏碱性缓冲液加等量甘油),盖上盖玻片,荧光或共聚焦显微镜下观察.
注意事项
:鬼笔环肽的分子量小,很容易通过细胞,不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理.药品价格昂贵,0.1mg的售价接近两千元,要节约使用.毒性较大,戴上手套操作.
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