谁能帮我问清RT-PCR,Real time-PCR和Real time RT-PCR?我看了一晚上电脑,这三个东西闪来闪去的.谁能帮我从实验方法的角度分一下这三个东西.有不包括反转的Real time-PCR吗?这么叫有米什么特殊意思?我
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/23 20:36:55
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谁能帮我问清RT-PCR,Real time-PCR和Real time RT-PCR?
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谁能帮我从实验方法的角度分一下这三个东西.
有不包括反转的Real time-PCR吗?
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我迷惑,
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Real-time PCR中文译作“实时聚合酶链反应”,是一种最新发展的定量PCR技术.该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量,较以往常用的终点定量的方法更加准确.根据所使用的技术不同,荧光定量PCR又可以分为TaqMan探针和SYBR Green I荧光染料两种方法.Real-time PCR所采用的专用PCR仪能够自动在每个循环的特定阶段对反应体系的荧光强度进行检测,实时的记录荧光强度的改变,从而对样品的浓度进行精确的定量.
RT-PCR是Reverse transcription PCR的简称,中文译作“逆转录聚合酶链反应”,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段.RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列.作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物.无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染.用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种.对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可.
Real time RT-PCR是将Real time-PCR的方法用于RT-PCR中,目的也是为了对样品浓度进行精确控制.
RT-PCR和Real time-PCR是没有必然联系的,两种技术可以一起使用,就是Real time RT-PCR;也可以单独使用.就是名称有点绕,逆转录PCR先出现,所以占用了RT-PCR这个简写,等Real time-PCR技术出现后,本来按照惯例,简写也是RT-PCR,但为了与逆转录PCR相区别,还是写成Real time-PCR.