构建基因组文库需要注意哪些问题

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/04 23:00:59
构建基因组文库需要注意哪些问题

构建基因组文库需要注意哪些问题
构建基因组文库需要注意哪些问题

构建基因组文库需要注意哪些问题
产生 DNA片段的方法要求切点随机性高,使任一基因都可能被完整地克隆,并且最好在两侧都留有粘性末端以利于 DNA片段间的连接.机械剪切方法的优点是随机性高,可是所得片段两端没有粘性末端,有时较为不便与载体连接.用限制性核酸内切酶酶解的随机性较差,但是两端有粘性末端,便于和载体相连接（见重组DNA技术）.
基因载体通常根据待克隆的 DNA片段长度来选择.在制作原核生物基因文库时,因基因组较小,可把 DNA片段切得短些,可选用质粒如pBR322等作载体.真核生物的基因内部常有称为内含子的非编码区,使一个天然基因的长度比实际编码的部分要长得多,基因文库中待克隆的 DNA片段便应长些,以保证得到完整的基因.通常采用的载体有经过改建的噬菌体如λCharon4A（长度462kb,可克隆外源DNA长度 8.22.2kb）和粘性质粒(例如pHC79,长度6.4kb,可容纳外源DNA长度37～50kb)等.

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